BAKTERIOLOGI

Pewarnaan Gram

-       Dikembangkan oleh Christian Gram (1884)

-       2 macam bakteri:  Gram  (ungu) & Gram  (merah)

No		Reaksi & penampakan bakteri
		Gram	Gram
1.	Kristal Violet	Sel berwarna ungu	·         Ungu
2.	Lar. Yodium	Terbentuk kompleks KV-I       Sel tetap ungu	·         Kompleks KV-I Ungu
3.	Alkohol	Dinding sel mengalami dehidrasi: pori-pori menciut; daya rembes dinding sel & membran menurun, KV-I tak dapat keluar dari sel.       Sel tetap ungu	·         Lemak terekstraksi dari dinding sel; pori-pori mengembang KV-I keluar.     ·         Sel tak berwarna
4.	Safranin	Sel tak terpengaruh       Tetap ungu	·         Sel menyerap z.w.     ·         Merah

Pewarnaan Tahan Asam

·      Khusus untuk Mycobacterium: M. tuberculosis

                                                                   M. leprae
karena banyak mengandung as. mikolat & lemak.

·      # kand. Lemak "tak permeable terhadap zat-zat warna      yang umum.
  \tidak terwarnai oleh metode pewarnaan biasa.

Bila dipaksakan,

 mis. dengan menggunakan: mordan

                                                            pemanasan

maka sekali ia menyerap zat warna " akan tetap dipegang teguh, tak akan dilepaskan lagi, walaupun digunakan zat peluntur yang kuat seperti alkohol – asam.

\ disebut bakteri tahan asam (BTA)

Cara : (P. Ziehl – Nielsen)

-       buat apusan.

-       Warnai dengan karbol fuksin 5 menit sambil dipanasi dengan api kecil.

-       Z.w. dibuang, lalu tetesi as. alk, 1 – 2 detik.

-       Cuci dengan air kran.

-       + lar. methylen blue 1 menit.

-       Cuci, keringkan.

Hasil : BTA " merah

    Bukan BTA " biru

Pewarnaan Kapsul

·      Kapsul merupakan lap. lendir yang menyelubungi sel. sebagai: - cadangan makanan
                - untuk perlindungan

·      Tanpa pewarnaan, kapsul sukar dilihat di bawah mikroskop, sebab :

-        tak berwarna.

-        indek biasnya rendah.

·                                                                                                                                                Kapsul bersifat non ionik " 

·                                                                                                                                                \ tidak diwarnai dengan p. biasa, tetapi dengan p. negatif.

Cara (M. Burry) :

1)        Sediakan 2 kaca objek bersih.

2)        Teteskan 1 tetes tinta Cina pada salah satu kaca objek. Suspensikan 1 öse bakteri pada tetesan tinta Cina tadi sampai homogen, jangan melebar.

3)        Lebarkan suspensi tersebut dengan menggosokan pada kaca objek kedua, (seperti pembuatan hapusan darah).

4)        Keringkan & fiksasi.

5)        Tambahkan boraks Methylen Blue 2% di atas sediaan tadi dan diamkan selama 1 – 2 menit.

6)        Cuci dan keringkan di udara.

7)        Periksa di bawah mikroskop.

Pewarnaan Spora

·      Spesies-spesies Bacilus & Clostridium" menghasilkan endospora yang sangat resisten

·      Karena struktur dinding spora yang keras & tebal " sukar diwarnai " harus dengan pemanasan. Sekali terwarnai sukar dihilangkan.

·      Ada beberapa metode :

-    Klein

-    Schaeffer & Fulton

Cara:

-       buat olesan.

-       Genangi dengan Malacite green 3 menit sambil dipanaskan.

-       Dinginkan, tambah H₂ SO₄ 1% 1 – 2 detik.

-       Cuci dengan air

-       Genangi dengan safranin  1 menit.

-       Cuci, keringkan.

GRAM + COCCUS

Staphylococcus

             Pewarnaan Gram à bentuk Coccus, susunan 2-2/4-4, bergerombol seperti buah anggur.

Bakteri Gram Positif  Coccus

            BIAKAN

            Agar Darah à Keruh, Halus, Licin, Berpigmen.

A
Hemolisis (S.aureus)

                                     

B
anhemolisis (S.epidermidis)

C

anhemolisis (S.saprophyticus)

MSA (Manitol Salt Agar)

              Indicator phenol red, inhibitor bile salt, sumber carbon manitol.

              Koloni Kuning /Manitol Fermenter (S.aureus),

              tumbuh kerdil/Non MF (S.epidermidis, S.saprophyticus)

Staphylococcus aureus

           TSB -> Keruh homogen

Uji Sensitivity

(Novobiocin 30 mg)

Sensitif: zona bening >16 mm (S. aureus & S.epidermidis) intermediate : 13-16mm Resisten: zona bening <13 b="b" mm="mm">

(S.saprophyticus)

Uji serologi (Coagulasi Plasma Test) Control: koloni+NaClàkeruh homogen Test: 1ose koloni+ 1ose Plasma Sitratà Aglutinasi/ butiran pasir(+) Tersangka:S.aureus Uji Biokimia S.aureus  Glukosa(+)Manitol(+) S.epidermidis Glukosa(+)Manitol(-) S.saprophyticus Glukosa(-)Manitol(-)

Streptococcus

       Pewarnaan Gram:

       Bentuk Coccus, susunan 2-2/ Berantai

streptococcus

       BIAKAN

       TSB: Keruh, mengendap dikocok seperti kapas.

        Agar Darah:

        Jernih, Halus, Licin, Tdk Berpigmen, putih abu-abu

Streptococcus α-> hemodigesti (ex:S.viridans)

Streptococcus β-> hemolisis (ex:S.pyogenes)

Streptococcus γ-> anhemolisis

Uji Sensitivity (Basitrasin 10 mg)->

              Utk membedakan Streptococcus β grup A pathogen/ tidak.

              Cara: Buat suspensi kuman dengan NaCl fis ~stdr Mc Farland 0,5.

                          Masukkan lidi kapas steril, oleskan pada Muller Hinton Agar .

                          Letakkan Bacitrasin sebnyak 4 Buah.

                          Eramkan 24 jam 37°C